Primer reporte de un caso importado de Malaria por plasmodium ovale curtisi en Paraguay, confirmado por diagnóstico molecular / First report of an imported case of plasmodium ovale curtisi malaria in Paraguay confirmed by molecular diagnosis

En países donde el Plasmodium ovale no es común, los microscopistas tienden a identificarlo de manera errónea como Plasmodium vivax. En este trabajo reportamos la identificación de la especie P. ovale curtisi por el método de PCR múltiple semianidada (SnM-PCR) y la secuenciación de la subunidad pequeña del gen del ARN 18S, en un paciente paraguayo de 44 años de edad que vino en el 2.013 de Guinea Ecuatorial, África Occidental, a quien se le diagnosticó una infección por P. vivax por microscopía convencional. El empleo de métodos moleculares para la identificación de casos importados de infección con especies del género Plasmodium es uno de los objetivos principales en el control y la prevención de la malaria en Paraguay, teniendo en cuenta que el país se encuentra en fase de pre-eliminación de la enfermedad.

In countries where Plasmodium ovale is not common, the microscopists often mistakenlyidentify it as Plasmodium vivax. Here, we report the identification of the specie P. ovalecurtisi by the Seminested Multiplex PCR (SnM-PCR) technique and sequencing of the 18ssuRNA gene in a 44-year old Paraguayan male who came in 2013 from the EquatorialGuinea, Western Africa, and was diagnosed as having P. vivax infection by conventionalmicroscopy. Molecular biology tools for the identification of imported cases of infectionwith species of the genus Plasmodium is one of the main goals in the control andprevention of malaria in Paraguay, considering that the country is in the pre-eliminationphase of the disease.

Detección por PCR múltiple de gérmenes atípicos en pacientes con neumonía adquirida de la comunidad que concurrieron al INERAM / Multiplex PCR for detection of atypical bacteria in community-acquired pneumonia patients attending INERAM Hospital

La neumonía adquirida en la comunidad (NAC) es una causa relevante de morbilidad y mortalidad. Los métodos convencionales fracasan en la detección de Mycoplasma pneumoniae, Chlamydophila pneumoniae y Legionella pneumophila. Estas bacterias pueden generar procesos infecciosos crónicos y no responden a ciertos antibióticos empleados en el tratamiento empírico de la NAC. Nuestro objetivo fue detectar de forma simultánea, mediante métodos moleculares, M. pneumoniae, C. pneumoniae y L. pneumophila en muestras respiratorias de pacientes con NAC, y describir los gérmenes comunes aislados por métodos microbiológicos convencionales. Estudio observacional descriptivo de corte trasverso realizado en el año 2011, en el que se analizaron 60 muestras respiratorias provenientes de pacientes con NAC atendidos en el INERAM (Instituto de Enfermedades Respiratorias y del Ambiente). Para la PCR múltiple se emplearon primers específicos para genes de los tres microorganismos citados. El protocolo de estudio fue aprobado por los comités científico y ético del IICS y se mantuvieron en estricta confidencialidad los datos personales de los pacientes. La PCR múltiple permitió la amplificación de los genes específicos de estos microorganismos con límites de sensibilidad comprendidos entre 0,05 y 0,001 ng/µL de ADN. M. pneumoniae y C. pneumoniae estuvieron presentes respectivamente en el 18,3% y 1,7% del total de muestras analizadas. No se detectó la presencia de L. pneumophila. Los gérmenes comunes más frecuentemente aislados fueron estreptococos del grupo viridans y Candida spp.La técnica de PCR múltiple permitió detectar M. pneumoniae, C. pneumoniae y L. pneumophila, siendo el primero de los tres el más frecuentemente detectado en pacientes con NAC

Caracterización de cepas de Leishmania, por medio de la técnica de PCR-RFLP de la región del Spliced Leader Miniexon (SLME), aisladas de humanos y caninos en Paraguay / Characterization of Leishmania strains using PCR-RFLP of Spliced Leader Miniexon (SLME) in human and canine isolates in Paraguay

La leishmaniosis es una enfermedad parasitaria con varias formas clínicas, desde lesiones cutáneas leves hasta enfermedades fatales con comprometimiento visceral. Existen varias técnicas moleculares como por ejemplo la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) que amplifica diferentes secuencias blanco, una de ellas es la región SLME (spliced leader miniexon), el producto se corta con enzimas de restricción (PCR-RFLP), permitiendo la identificación de las especies de Leishmania. Este trabajo fue realizado con el objetivo de caracterizar las cepas de Leishmania, empleando una PCR-RFLP de la región SLME, aisladas de humanos y caninos, provenientes de distintas zonas del país. Se analizaron 12 aislados de humanos y 40 de caninos debidamente codificados. Se empleó un par de cebadores para la región SLME, los productos amplificados fueron cortados con las enzimas Hae III y Nco I (RFLP) y los patrones de bandas analizados. Se detectó en un primer paso la presencia de parásitos del subgénero Viannia en 7 aislados de humanos y correspondientes al subgénero Leishmania en 5 aislados de humanos y 40 de caninos. La RFLP según los patrones de bandas permitió identificar a L. braziliensis en aislados de leishmaniosis tegumentaria y L. chagasi en los casos de leishmaniosis visceral. Es importante resaltar que este trabajo es el primero en el país en realizar la caracterización molecular a nivel de especies de Leishmania y los hallazgos descritos tienen una implicación a nivel epidemiológico, contribuyendo con las estrategias de vigilancia y control de la enfermedad. Adicionalmente, se sugiere el uso de otros marcadores genéticos para identificar genotipos o perfiles genéticos diferentes, entre cepas de estas especies

Detección del virus influenza pandémica A (H1N1) en Paraguay 2009, y amplificación de genes hemaglutinina y neuraminidasa / Detection of pandemic influenza A (H1N1) virus in Paraguay in 2009, and amplification of the hemagglutinin and neuraminidase genes

Introducción: El virus de influenza pandémica A (H1N1), cuya circulación se inició en abril del año 2009 en México y Estados Unidos, se constituyó en el último virus pandémico desde los casos detectados en Hong Kong en 1968. El genoma del virus de influenza A está formado por 8 segmentos ARN de cadena simple (polaridad negativa), que codifican para 10 proteínas. Los genes hemaglutinina y neuraminidasa codifican para dos proteínas de superficie y son los utilizados en los análisis de variabilidad genética. Objetivos: a) Detectar la circulación del virus pandémico en pacientes con sospecha clínica de infección por influenza, y b) Diseñar una estrategia para amplificar de forma completa los genes hemaglutinina y neuraminidasa. Materiales y Métodos: Fueron analizados por Real-Time RT-PCR (transcripción reversa y reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real) un total de 181 muestras de hisopado faríngeo, colectadas o remitidas al Hospital de Clínicas, del 6 de agosto al 11 de octubre de 2009. Para el diseño de amplificación de los genes hemaglutinina y neuraminidasa, se han utilizado herramientas bioinformáticas y reacción en cadena de la polimerasa. Resultados: Del total de muestras analizadas, 27 (14.9 %) dieron resultado positivo para el nuevo virus pandémico. Por otra parte, la amplificación completa de ambos genes proporcionó los resultados esperados: 1678-pares de bases (pb) para la hemaglutinina, y 1427-pb para la neuraminidasa. Conclusiones: La implementación de esta tecnología de amplificación permitirá posteriormente la secuenciación de estos genes a fin de determinar las variaciones genéticas del virus que podrían tener un impacto en la salud humana.

Introduction: The pandemic influenza A (H1N1) virus, whose circulation was detected in April 2009 in Mexico and the United States, is the latest pandemic virus since the cases reported in Hong Kong in 1968. The genome of the influenza A virus consists of 8 segments of single-stranded RNA of negative polarity, coding for 10 proteins. The hemagglutinin and neuraminidase genes encode for two surface proteins and are used in the analysis of genetic variability. Objectives: a) to detect circulation of the pandemic virus in patients with clinical suspicion of influenza infection and b) design a strategy to fully amplify the hemagglutinin and neuraminidase genes.Materials and Methods: A total of 181 pharyngeal swabs were collected and sent to the Hospital de Clínicas for analysis using Real-Time RT-PCR (reverse transcription and polymerase chain reaction in real time) between 6 August and 11 October 2009. To design the amplification of hemagglutinin and neuraminidase genes, we used bioinformatic tools and polimerase chain reaction. Results: Of the samples analyzed, 27 (14.9%) were positive for the new pandemic virus. Moreover, the complete amplification of both genes provided the expected results: 1678-base pairs (bp) for the hemagglutinin, and 1427-bp for neuraminidase. Conclusions: The use of this technology for amplification will eventually allow sequencing to identify genetic variations of the virus that could have an impact on human health.

Transmisión congénita de la enfermedad de Chagas en el Paraguay / Congenital transmission of Chagas disease in Paraguay

Las estrategias actuales recomendadas para el diagnostico de la infección congénita chagásica requieren del diagnóstico serológico convencional en mujeres embarazadas para detectar su infección y la confirmación parasitológica en recién nacidos infectados verticalmente. La detección de parásitos en sangre no resulta un método fácil de aplicar a gran escala y a nivel de salud pública por lo que se recomienda finalmente la serología convencional, es decir la detección de IgG anti-T. cruzi en infantes mayores a 8 meses de edad. Teniendo en cuenta estas recomendaciones nuestro grupo ha diseñado estrategias operativas en áreas rurales endémicas que permiten la rápida detección y tratamiento de infantes infectados congénitamente. Demostramos que la descentralización de los estudios serológicos de los grandes Hospitales Regionales ayuda a la rápida identificación de las mujeres infectadas, como también el registro de su estado de infección en las fichas familiares, prenatal y pediátrica. Los resultados de más de 15 años de estudio de nuestro grupo, indican que a pesar de la alta sensibilidad de la técnica reacción en cadena de la polimerasa (PCR), resulta muy complejo su empleo con fines de diagnóstico a nivel rural y en gran escala, siendo muy útil para evaluar el tratamiento realizado en los niños infectados. La serología convencional permite la detección inequívoca de anticuerpos del tipo IgG en infantes infectados congénitamente después de los 8 meses de edad (tiempo máximo observado para el clearence de anticuerpos maternos). Sin embargo esta estrategia hace que el tiempo requerido en el seguimiento para descartar transmisión congénita disminuya la adherencia durante el periodo de seguimiento con una importante pérdida de niños que no son traídos al control. La detección de casos de transmisión congénita aumenta notablemente cuando se utiliza una combinación de las técnicas serológicas convencionales y un ELISA que hemos diseñado con el antígeno recombinante de fase aguda, “shed acute phase antigen” (SAPA) que permite la detección inequívoca de infantes infectados congénitamente a los 3 meses de edad

The current strategies recommended for the diagnosis of congenital Chagas disease require the conventional serological diagnosis in pregnant women to detect their infection and the parasitological confirmation in the congenitally infected newborns. The detection of parasites in blood is not a method easy to apply at large scale and at public health level. Therefore, the conventional serology is recommended, i.e. detection of anti-T.cruzi IgG in infants older than eight months of age. Considering these recommendations, our group has designed operative strategies in endemic rural areas that allow the rapid detection and treatment of congenitally infected infants. We have demonstrated that the decentralization of the serological studies from the Regional Hospitals contributes to the fast identification of the infected women together with the registration of their infection status in the family, prenatal and pediatric files. The results of over fifteen years of study of our group indicate that, in spite of the high sensitivity of PCR, its use with diagnosis purposes is very complex at large scale and in rural areas. However, the polymerase chain reaction (PCR) technique is very useful to evaluate the treatment of infected children. The conventional IgG serology allows the unequivocal detection of congenitally infected infants after eight months of age (maximum time observed for the clearance of maternal antibodies). However, this strategy makes that the time required to rule out a congenital transmission in the follow-up diminishes adherence with an important loss of children that are not brought to control. The detection of congenital transmission cases increases remarkably when a combination of the conventional serological techniques and an ELISA that we designed with the recombinant protein “shed acute phase antigen” (SAPA) is used, allowing the unequivocal detection of congenitally infected children at three months of age

Sensibilidad y especificidad del método inmunocromatográfico utilizado para el diagnóstico de rotavirus / Sensibility and specificity of the immunochromatographic method used for rotavirus diagnosis

El rotavirus (RV) es el principal agente viral causante de diarrea aguda en niños menores de 5 años y es responsable de aproximadamente el 6% de las muertes en este grupo etáreo, lo que conlleva la necesidad de utilizar métodos de diagnósticos rápidos y confiables. El objetivo del estudio es evaluar la sensibilidad y especificidad del método inmunocromatográfico (ICG), en el que se basan muchos kits comerciales utilizados para el diagnóstico de rotavirus grupo A, tomando como referencia el método de electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE). Se seleccionaron muestras de heces de 317 pacientes con diarrea aguda que concurrieron a un laboratorio privado de mayo a noviembre del 2006, con pedido de análisis de rotavirus y todos los datos de los pacientes fueron manejados de manera confidencial Se utilizaron kits de las marcas comerciales Operón simple (n=154) o SD Bioline rotavirus (n=163), siguiendo estrictamente las instrucciones del fabricante. Las muestras fueron conservadas en frío y remitidas al IICS para la realización de los estudios moleculares. La sensibilidad obtenida por el método ICG fue de 97,8% y la especificidad de 84%. La concordancia absoluta fue del 90%. Las muestras que dieron resultados discrepantes entre ICG y PAGE, fueron confirmadas por nRT-PCR, resultados que coincidieron con los obtenidos por PAGE. La sensibilidad del método ICG es muy buena, si bien la especificidad es moderada el método puede ser utilizado como screening para el diagnóstico rápido de rotavirus y sería aconsejable utilizar métodos más específicos como los moleculares para estudios epidemiológicos.

The rotavirus (RV) is the major causative agent of acute viral diarrhea in children under 5 years old and is responsible for approximately 6% of the deaths in this age group making necessary the use of quick and reliable diagnosis methods. The aim of this study is to evaluate the sensibility and specificity of the immunochromatographic method (ICG) on which many commercial kits used for the diagnosis of A rotavirus group are based taking as a reference the polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Feces samples were collected from 317 patients with acute that attended a private laboratory from May to November, 2006 for rotavirus analysis. All the information of the patients was managed confidentially. Kits of the commercial brands simple Operón (n=154) or SD Bioline rotavirus (n=163) were used strictly following the instructions of the manufacturers. Samples were maintained in cold and sent to the IICS for the performance of the molecular studies. The sensibility obtained by the method ICG was 97.8%, the specificity was 84% and the absolute concordance was 90 %. The samples that gave discrepant results between ICG and PAGE were confirmed by nRT-PCR that provided results similar to those obtained by PAGE. The sensibility of the ICG method is very good and though the specificity is moderated it can be used as screening for the quick diagnosis of rotavirus and it would be advisable to use more specific methods, as the molecular ones, for epidemiological studies.

Electroferotipos cortos de rotavirus detectados en adultos con diarrea en Paraguay / Short electropherotypes of rotavirus detected in adults with diarrhea in Paraguay

La presencia de rotavirus en adultos ha sido subestimada por mucho tiempo debido a que la mayor incidencia y patogenicidad se observa en niños menores de 5 años. Con el fin de determinar los electroferotipos circulantes en adultos, se empleó la técnica de PAGE para analizar 23 aislados de rotavirus de individuos adultos (promedio de edad: 42,5 años; rango:24 a 67 años), recolectados entre Septiembre de 2003 a Febrero de 2005 del Laboratorio del Hospital San Roque, Asunción. En las 23 muestras se detectaron 5 electroferotipos diferentes, 19 presentaron alguno de los 3 patrones largos detectados (denominados LA, LB y LC) y 4 presentaron algún patrón corto (SA y SB). Desde 1998 hasta la fecha, nuestro grupo de trabajo detectó un solo caso de rotavirus con patrón corto (aislado en septiembre de 1999) luego de analizar más de 1500 heces de niños con diarrea aguda. Estudios previos en población infantil, han reportado que se necesitan varios años de estudio para identificar rotavirus con patrones cortos en una comunidad, sin embargo nuestros resultados sugieren que además es importante ampliar las variables demográficas de la población de estudio para encontrar más variantes de rotavirus, como en este caso es la aparición de patrones cortos en adultos sin que estos se presenten en niños.

Although rotavirus is recognized as the major ethiologic agent of acute diarrheal disease in children, the role of rotavirus as a pathogen in adults has long been underappreciated. In order to determine the electropherotypes of rotavirus that circulated in adults in Paraguay, 23 rotavirus isolated from patients older than 24 years (mean=42.5 range = 24­67) were analyzed by PAGE. Samples were collected at the Clinical Lab of the San Roque Hospital, Asunción,Paraguay from September 2003 to February 2005. Five different electropherotypes were detected, 19 samples showed long patterns (named LA, LB and LC) and 4 samples a short pattern (named SA and SB). Since 1998, our group has only detected one sample with a short pattern electropherotype (isolated in September 1999) in more than 1500 grounds of children with acute diarrhea. These results showed that it is necessary to study many epidemic years to detect rotavirus with short electropherotypes. However, we found that it is important to increase the demographic variables to find more rotavirus variability in a community, exemplified here by the short electropherotypes detected in adults.

Presencia de rotavirus en adultos con diarrea en Asunción, Paraguay / [Incidence of rotavirus in adults with diarrhea in Asunción, Paraguay]

From October 2001 to March 2004, 92 out of 533 (17.3

) fecal samples of patients over 18 years of age were positive for rotavirus. There were not differences of rotavirus incidence between age groups. Although in Paraguay, rotavirus infections in children less than 5 years old present a seasonal peak pattern (since June to October), in adults rotavirus was present throughout the year with the same frequency. Results presented here reinforce the notion that rotavirus should be considered in the differential diagnosis of diarrhea in adults.

Implementación y evaluación de un sistema localmente sustentable de diagnostico prenatal que permite detectar casos de transmisión congénita de la enfermedad de Chagas en zonas endémicas del Paraguay / Implementation and evaluation of a locally sustainable system of prenatal diagnosis to detect cases of congenital Chagas disease in endemic areas of Paraguay

A locally sustainable system of prenatal screening of Trypanosoma cruzi infection has been implemented in rural health care centers of endemic areas in Paraguay A total of 61.091 women from Paraguari and Cordillera Departments were serologically evaluated, where 7.802 (12,7%) resulted to be anti-T. cruzi IgG positive. A total of 1,865 infants born to seropositive mothers were examined by parasitological techniques, such as direct microscopic observation and polymerase chain reaction, and serologically by ELISA, ELISA-SAPA and IFI. 104 infected babies were detected and treated with benznidazole. The recovery of babies born to seropositive mothers performing a single examination at the age of 6 months was significantly higher, as compared with the recommended method involving two examinations, both at birth and after 6 months of age. Although at 6 months of age in 7% of the infants maternal IgG was still detected. PCR was the most sensitive technique for early detection of T. cruzi infection in babies, but we do not recommend it use for diagnosis in high endemic areas, considering that for the screening of 815 babies, 2000 reactions were needed. We propose a strategy to detect congenital transmission of Chagas disease, based on a large-scale study, where the shortcomings of the different serological and parasitological techniques are discussed.

Clínica y laboratorio de la diarrea aguda por rotavirus en niños menores de 5 años

Presenta un estudio alos niños menores de 5 años de edad, de ambo sexos, que consultan al servicio de urgencias de la cátedra de pediatría del hospital de clínicas e internados en la sala de lactantes, por cuadros de diarrea aguda siendo la causa más importante los los rotavirus

Detección de ADN de Trypanosoma cruzi en heces secas de triatoma infestans: PCR vs Xenodiagnostico en un apoblación de niños infectados / Annual reports 1995 / Detection of Trypanosoma cruzi DNA in dried feces of triatoma infestans: Comparison of PCR with Xenodiagnosis in chronic Chagasic patients

En la enfermedad de Chagas, la detección del agente T. cruzi en sangre circulante se considera fundamental para el diagnòstico en infecciones recientes (etapa aguda) como ser: transmisión congénita, accidentes de laboratorio, transfución sanguínea y en aquellos casos de sospecha de picadura del insecto vector. En la etapa crónica de la enfermedad (cuyo inicio no es fácil de definir), el diagnóstico se basa en técnicas serológicas y la detección de parasitos en sangre puede considerarse como un criterio válido para iniciar el tratamiento antichagásico en individuos jóvenes. La sensibilidad de las técnicas convencionales parasitológicas en la etapa crónica de la enfermermedad de Chagas es muy baja considerandose como mejor método al xenodiagnóstico con una sensibilidad del 30-50 por ciento . Actualmente la técnica de amplificación de ADN, reacción en cadena de la polimerasa (PCR) aplicada a muestras de sangre de individuos infectados con T.cruzi en forma crónica, ha demostrado una sensibilidad de 80 por ciento. No hemos propuesto verificar si el PCR combinado con una amplificación biológica como el Xenodiagnóstico, aumenta la sensibilidad de la detección de paràsitos circulantes en sangre. Con este objetivo se sometió a xenodiagnóstico a 22 niños seropositivos para T. cruzi y 3 seronegaticos. Los T. infestans empleados en el xenodiagnóstico, se colocaron en frascos individuales y se analizaron las heces depositadas en papeles de filtro, correspondiente a los primeros 8 días. Se analizaron por PCR, i) las muestras de sangre de estos niños y, ii) las heces secas de T. infestans depositadas en papel de filtro. De los 22 niños seropisitivos, 3 (13.6 por ciento) tuvieron parasitemia directa positiva, y 17(&& por ciento) fueron niños positivos por la técnica PCR en sangre. Se obtuvieron resultados de xenodiagnostico en solo 19 niños seropositivos cuyas vinchucas sobrevivieron los 45 días necesarios para el xenodiagnóstico; encontrandose que 11 de las 19 muestras (58 por ciento) fueron positivas. Sin embargo, al aplicar el PCR a las heces secas se detecto ADN de T. cruzi en 16 de las 19 muestras aumentando el numero de muestras positivas a un 84 por ciento.

Detección de ADN de Trypanosoma cruzi en heces secas de triatoma infestans: PCR vs Xenodiagnostico en un apoblación de niños infectados / Annual reports 1995 / Detection of Trypanosoma cruzi DNA in dried feces of triatoma infestans: Comparison of PCR with Xenodiagnosis in chronic Chagasic patients

En la enfermedad de Chagas, la detección del agente T. cruzi en sangre circulante se considera fundamental para el diagnòstico en infecciones recientes (etapa aguda) como ser: transmisión congénita, accidentes de laboratorio, transfución sanguínea y en aquellos casos de sospecha de picadura del insecto vector. En la etapa crónica de la enfermedad (cuyo inicio no es fácil de definir), el diagnóstico se basa en técnicas serológicas y la detección de parasitos en sangre puede considerarse como un criterio válido para iniciar el tratamiento antichagásico en individuos jóvenes. La sensibilidad de las técnicas convencionales parasitológicas en la etapa crónica de la enfermermedad de Chagas es muy baja considerandose como mejor método al xenodiagnóstico con una sensibilidad del 30-50 por ciento . Actualmente la técnica de amplificación de ADN, reacción en cadena de la polimerasa (PCR) aplicada a muestras de sangre de individuos infectados con T.cruzi en forma crónica, ha demostrado una sensibilidad de 80 por ciento. No hemos propuesto verificar si el PCR combinado con una amplificación biológica como el Xenodiagnóstico, aumenta la sensibilidad de la detección de paràsitos circulantes en sangre. Con este objetivo se sometió a xenodiagnóstico a 22 niños seropositivos para T. cruzi y 3 seronegaticos. Los T. infestans empleados en el xenodiagnóstico, se colocaron en frascos individuales y se analizaron las heces depositadas en papeles de filtro, correspondiente a los primeros 8 días. Se analizaron por PCR, i) las muestras de sangre de estos niños y, ii) las heces secas de T. infestans depositadas en papel de filtro. De los 22 niños seropisitivos, 3 (13.6 por ciento) tuvieron parasitemia directa positiva, y 17(&& por ciento) fueron niños positivos por la técnica PCR en sangre. Se obtuvieron resultados de xenodiagnostico en solo 19 niños seropositivos cuyas vinchucas sobrevivieron los 45 días necesarios para el xenodiagnóstico; encontrandose que 11 de las 19 muestras (58 por ciento) fueron positivas. Sin embargo, al aplicar el PCR a las heces secas se detecto ADN de T. cruzi en 16 de las 19 muestras aumentando el numero de muestras positivas a un 84 por ciento

Dosis letal media (LD50) y alteraciones ultraestructurales hepaticas inducidas por Eugenia uniflora, N.V. "Nängapiry" / Median lethal dose (LD50) and hepatic ultrastructural changes induced by Eugenia uniflora, N.V. \"Nängapiry\"

Se determinó la dosis letal media del extracto etanol: aguda 7:3 de hojas de Eugenia uniflora por vía intraperitoneal en ratones Balb-C, evaluando las alteraciones hepáticas por microscopía óptica y electrónica